Il est difficile de recommander une méthode plutôt qu’une autre, mais il peut néanmoins être constaté que la fixation à chaud avec flambage de l’alcool présente plus de risques que la fixation à froid : risques de brûlure et de projections de contaminants.

Il est à préciser que la fixation à chaud est déconseillée lors de fixation de produits pathologiques car les cellules qu'ils contiennent seraient abîmées rendant la lecture difficile.

Lors d’une fixation à froid, le temps de contact avec l'alcool doit être supérieur ou égal à 3 minutes .

La question de la viabilité des bactéries après fixation à la flamme, à l'alcool à froid, à chaud...peut cependant se poser et être mis en évidence.

Des frottis de suspensions bactériennes de Bacillus megaterium (avec spores) et de Staphylococcus aureus réalisés sur lames de verre et séchés à l'air sont soumis à différents traitements :

• fixation par la chaleur (frottis vers le haut) de la flamme du Bec Bunsen (3 fois 1/2 seconde) ou au Bec Hoffman (3 passages de 3 secondes)

• suivie éventuellement d'une  fixation à l'alcool à froid 3 ou 5 minutes ou à l'alcool flambé.

Une application des lames ainsi préparées est réalisée sur des films gélosés (Pétri films) et les résultats des cultures sont les suivants :